세균배양 배지 실험 - segyunbaeyang baeji silheom

<들어가기에 앞서>

1. 배지의 정의

배지: 적당량의 영양성분을 혼합해서 미생물을 생존시키고 지속적으로 증식시키기 위해서 인공적으로 증식환경이 만들어진 상태, 미생물을 생육시키기 위한 각종 영양소의 혼합물을 말한다.

2. 배지의 주요성분

(1)펩톤(peptone): 카제인, 동물의 육류 등의 단백질을 pepsin 또는 trypsin, pancreatin등의 효소로 소화시켜서 미량의 proteose를 함유한 작은 분자의 황색 분말로서 수용상태에서는 황갈색의 약한 산성을 나타낸다.

(2)육즙성분(meat extract 또는beef extract): 쇠고기의 근육부분에서 수용성 침출 물을 추출해서 농축시켜 만든 것으로 염류, 발육소, 핵산성분, 기타 당분, 아미노산, 비응고성 단백질을 제공한다.

(3)효모추출물(yeast extract): 효모에서 추출한 수용성 침출물질로서 담황색 분말이다. 염류, 발육소, 핵산성분, 당분, 아미노산, 비 응고성 단백질 등을 세균대사에 제공한다.

(4)젤라틴(gelatin): 동물의 뼈, 피부, 인대, 건 등을 끓여서 그 액체를 건조시킨 황갈색의 입자 또는 분말이며 일명 아교라고도 한다.

처음에는 고형배지에 응용되었으나 용해 온도가 37℃ 이하이기 때문에 근래에는 단백질 분해시험 중의 하나인 젤라틴 분해효소 검출을 위해 사용한다.

(5)한천(agar): 바다의 홍조류에서 추출되며 고체 배지의 조제시 유용한 성질을 갖고있다. 극히 일부 미생물을 제외한 대부분의 미생물은 한천을 분해하지 못한다.

따라서 한천은 미생물이 생육하는 동안고체 형태 그대로 존재한다. 한천은 100℃에서 액화되며 40℃에 도달할 때까지도 액상으로 존재한다. 한천은 일단 굳게 되면 배양온도가 100℃가 되어도 용해되지 않고 고체 상태로 존재한다.

3. 배지의 종류

(1) 재료에 따른 분류

①천연배지: 배지 재료가 천연물로서 그의 화학조성이 확실히 알려져 있지 않은 배지를 천연배지라 한다. 감자한천, Oat meal 배지, 볏짚 배지 등이 있다.

②합성배지: 화학조성이 알려져 있는 재료만으로 만들어진 배지로서 Czapek – dox 등이 있다.

③반합성 배지: 합성 배지 성분의 일부를 peptone, yeast extract 등 화학조성이 밝혀 지지 않은 천연물로 바꾸어 놓은 배지이다.

(2) 사용형태에 따른 분류

①액체배지: 한천이 들어있지 않은 액상의 배지이며 이들은 미생물의 중식에 이용되고, 세균의 생화학적 검사, 증식, 대사산물을 검출할 목적으로 쓰인다.

②고체배지: 액체배지에 한천, 젤라틴 혹은 실리카겔 등을 첨가하여 굳힌 것으로 미생물의 보존배양, 순수보리 등에 사용된다. 사용목적에 따라 다음과 같이 분류할 수 있다.

ⓐ 평판배지(plate media): 배양접시에 배지를 약 4mm두께 정도 넣어 굳힌 것이 평판배지인데 주로 호기성 미생물의 분리배양, 집락의 관찰 등에 이용된다.

ⓑ 고층배지(butt media): 시험관을 세운 배지를 굳힌 것으로 주로 세균의 성상 검사, 통성 혐기성 세균의 보존, 세균의 유동성 검사 등에 이용된다.

ⓒ 사면배지(slant media): 시험관에 배지가 약 45도 경사가 되도록 굳힌 것으로 호기성 미생물의 증식, 보존 등에 쓰인다.

ⓓ 반사면 배지(semislant media): 고층 배지의 ⅓정도를 경사지게 만든 것을 반고층배지라고 한다. 세균의 생화학적 검사 등에 쓰인다.

3) 사용목적에 의한 분류

① 보통 배지: 보통배지는 될 수 있는 한 많은 미생물이 생육할 수 있도록 제조된 배지로서 세균용으로는 nutrient broth, nutrient agar, 사상균용으로는 감자한천, oat meal 등이 있다.

② 특수배지: 특수배지에는 선택배지, 판별배지, 증식배지, 생화학적 시험용 배지 등이 있다.

(a) 선택배지: 목적하는 미생물의 생육을 증진시키고 다른 미생물의 생육이 억제되도록 만들어진 배지로서 토양 혹은 병든 조직에서 목적하는 균을 분리 배양하기 위해서 많은 선택배지가 고안되고 있다.

(b) 판별배지: 미생물의 생화학적 성질을 이용하여, 여러 미생물이

혼재되어 있는 곳에서 목적으로 하는 미생물을 판별 또는 확인하기 위해서 만들어진 배지이다.

(c) 증식배지: 보통배지에서는 생육이 잘 안되거나, 또는 생육이 나쁜 미생물의 생장, 증식을 촉진시키는 것을 목적으로 하는 배지이다.

(d) 생화학적 실험용 배지: 생화학적 성질의 조사나 위한 것이나 세균의 분류, 동정을 위해 여러 종류가 개발되어 있다.

출처: chanjae's 마이너한 취미생활님의 블로그 http://chanjae.net/20

<실험 준비물>

샬레 10개, 비커, 은박 컵, 스푼, 스틱, 한천가루(일반 세균+곰팜이용), 핫플레이트

<실험 방법>

1. 비커에 스푼을 사용하여 한천가루를 깎아서 1스푼, 물 100ml를 넣은 후 잘 섞어준다.

2. 잘 섞인 용액을 은박 컵에 담아 살짝 끓여준다. 

※한 번 끓기 시작하면 바로 불을 끈다

3. 용액을 1~2분간 식힌 후, 위에 뜬 거품이나 굳은 잔여물을 스틱으로 걷어내고 샬레에 옮겨 담는다.

※ 샬레에 용액이 평평하게 찰 정도만 담는다.

4. 약 5~10분 후 용액이 완전히 굳으면 완성된 배지에 세균을 옮겨준다. 

5. 세균을 옮긴 배지는 뚜껑을 덮어 약 20~25도의 온도에 3일 동안 보관한다. 

<실험 대상>

-류 손(씻기 전), 류 손(비누 사용)

-손 손(씻기 전), 손 손(손소독제 사용)

-스마트폰, 안경닦이

-권 안경, 김 안경, 함 안경

※한 안경닦이로 며칠간 세 개의 안경을 닦았다.

<결과>

손 손(씻기 전)

손 손(손소독제 사용)

류 손(씻기 전)

류 손(비누 사용)

스마트폰

안경닦이

권 안경

김 안경

함 안경

안경닦이>>>>>>손 손>>스마트폰>>류 손>>손 소독>>>안경>비누

+류 손에서 배양된 세균과 류 스마트폰에서 배양된 세균이 거의 일치한다.

※위: 류 손, 아래: 류 스마트폰

+권, 김, 함 안경에서 배양된 세균이 모두 안경닦이에서도 배양되었다.

※오른쪽 위: 김 안경, 왼쪽 위:권 안경, 아래: 함 안경, 중간: 안경닦이