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SDS-PAGE 샘플준비시 가열이 필수인가요?
애니(대학원생)|2017.05.16 22:44
SDS-PAGE 샘플을 만들 때 SDS가 든 샘플버퍼를 넣고 95도씨에서 5분정도 가열해 주는데 이게 protein을 linear하게 만들어주고 여러 본드를 끊어줘서 프로틴이 보다 잘 내려가게 해 준다는 것은 알고 있습니다.
그런데 제가 보려는 프로틴이 밴드가 계속 안 떴었는데 이번에 히팅을 가하지 않고 샘플을 내리니 밴드가 단번에 보이게 되었습니다. 잡 밴드인가 싶다가도 너무 깔끔하게 마커상으로도 그 위치에 보여서 제가 보고자 하는 그 프로틴임을 알 수 있었습니다. 혹시 특정 프로틴의 경우 열을 가하는 것이 프로틴 파괴의 원인이 되기도 하나요??
#SDS
#PAGE
#Sample
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구슬이|2017.05.17
그럴 것 같습니다.
그리고, 보통 단백질을 확인할 때에도 heating 안 하고서 로딩하시는 분도 봤습니다. 그걸 보고서 저도 따라 해 봤더니 똑같이 밴드가 나오더라구요. sample buffer와 running buffer에도 SDS가 있어서 denaturation시킬 것입니다. heating한 것과 안 한 것과 비교해 봤을 때, 그래도 heating 한 쪽의 밴드가 아주 약간 더 잘 나오긴 햇습니다.
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애니|2017.05.17
감사합니다. 그렇다면 히팅을 안 하거나 조금만 해도 무방하다는 말씀이신가요??
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Lucid|2017.05.18
대부분의 경우 말씀하신 것과 같은 이유로 boiling을 해주곤 합니다. 하지만 막단백질과 같이 매우 hydrophobic한 단백질의 경우 boiling 과정에서 aggregate를 형성하기도 합니다. 이 경우엔 boiling을 하지 말아야 합니다. 결론: 케바케
